Les méthodes de diagnostic de la leishmaniose se regroupent en trois grands types : parasitologiques (mise en évidence directe du parasite), sérologiques (anticorps/antigènes) et moléculaires (ADN parasitaire). Le choix de la forme clinique (viscérale vs cutanée), du contexte et des moyens du laboratoire.

Diagnostic parasitologique (référence)
Examen microscopique direct : frottis ou imprégnation (frottis) coloré (Giemsa) à partir de ponction de moelle osseuse, rate, ganglion, sang ou biopsie cutanée pour visualiser les amastigotes de Leishmania.
​Culture sur milieux spécialisés (NNN, Schneider…) à partir des mêmes prélèvements, permettant l'isolement du parasite, éventuellement suivi d'isoenzymie ou de typage moléculaire.
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Diagnostic sérologique
Recherche d'anticorps spécifiques (surtout utile pour la leishmaniose viscérale) :
IFAT (immunofluorescence indirecte), ELISA, Western blot, test d'agglutination directe (DAT), tests rapides immunochromatographiques (bandelette rK39, etc.).
​Utile pour la VL car la réponse humorale est forte, mais moins performante pour certaines leishmanioses cutanées et chez l'immunodéprimé.
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Diagnostic moléculaire
PCR et dérivés (conventionnelle, temps réel, LAMP, RPA…) sur sang, aspiration de moelle, biopsies, frottis cutanés pour détecter et parfois taper l'ADN de Leishmania .
​Très sensible et spécifique, utile pour confirmer les formes pauciparasitaires et pour l'identification de l'espèce, mais coûteux et pas toujours disponible dans les zones endémiques.
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Examens complémentaires

Histopathologie : mise en évidence des amastigotes dans les coupes tissulaires (peau, moelle, foie, rate) avec aspect granulomateux ou inflammatoire.
Tests non spécifiques : cytopénies, syndrome inflammatoire, hypergammaglobulinémie dans la leishmaniose viscérale, utiles comme arguments d'orientation mais non spécifiques.