TP № 03 : Détermination de la pression osmotique par la méthode de la plasmolyse limite

Introduction

L'osmose est un phénomène de diffusion de la matière mis en évidence lorsque des molécules d'eau (de solvant de façon générale) traversent une membrane semi-perméable qui sépare deux liquides dont les concentrations en produits dissous sont différentes. La différence de concentration provoque une différence de pression osmotique qui engendre un déplacement du solvant à travers la membrane.

Plasmolyse limite : en état de turgescence, l'entrée d'eau s'arrête lorsque la pression exercée par ce mouvement (pression osmotique) est équilibrée par la pression de réaction de la paroi (pression de paroi ou pression de turgescence).

1. Matériels et réactifs

- Bulbe d'oignon ;

- Onze (11) verres de montre ;

- Solution de saccharose M (1 mol.L-1) (soit 342 g/L ou 34,2%) ;

- Eau distillée ;

- 2 pipettes de 5 ml;

- Lame-lamelles ;

- Microscope optique ;

- pinces fines et rasoir.

2. Méthodes

2.1 Principe

Pour connaître la pression osmotique d’un tissu, il suffit de chercher, dans une gamme de solutions de concentration croissante, celle qui en équilibre osmotique avec les cellules. Comme cet état d’équilibre n’est pas directement perceptible, en admet que la solution qui produit un faible début de plasmolyse (plasmolyse limite) est pratiquement isotonique du milieu cellulaire.

2.2 Protocole

- Préparer une série de 11 tubes contenant des concentrations croissantes de saccharose ;

- Mettre quelques millilitres de chaque solution dans 11 verres de montre posés sur une feuille de papier, sur laquelle on indiquera les concentrations correspondantes ;

- Prélever de petits fragments d’épiderme à l’aide d’une pince fine ;

- Placer les morceaux d'épiderme dans les verres de montre ;

- Attendre 15 à 30 min et observer.

3. Interprétation des résultats

• Observer sous microscope et dessiner les cellules dans les différents états possibles (turgescents, plasmolyse ou plasmolyse limite) et interpréter les résultats .
• Calculer la pression osmotique du suc vacuolaire exercée à -20°C par la solution de saccharose utilisé dans chaque verre, selon la Formule de Van’t Hoff : P=n*C*R*T (P : pression osmotique ; V : volume, R : constante des gaz parfaits = 0,082 , T° en K)
• Quelle est la concentration molaire correspond de la solution isotonique au suc vasculaire.